农杆菌化学感受态细胞 表达分析
简要描述：
农杆菌化学感受态细胞 表达分析 GV3101菌株的背景为C58型，核基因含利fu平抗性基因rif。为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。
产品时间：2024-08-09
打印当前页GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell
农杆菌化学感受态细胞
产品标签：
GV3101(pSoup-p19) 菌株；农杆菌感受态细胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素；EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物转基因研究；
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产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 | MF2469-1000UL | 10×100μl | 288 |
MF2469-5000UL | 50×100μl | 1228 |
产品描述：
GV3101菌株的背景为C58型，核基因含利fu平抗性基因rif。为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。pMP90（pTiC58DT-DNA）型Ti质粒携带筛选标签Gent，赋予GV3101菌株庆大mei素抗性。在GV3101菌株中转入help质粒：pSoup-p19，即得到GV3101(pSoup-p19)菌株，可协助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌内复制，同时赋予该菌株四环素（Tet）抗性。另外，来源于番茄丛矮病毒的p19蛋白，能抑制宿主对外源基因的RNA沉默效应，提高异源基因转录子的稳定性，进而改善异源蛋白的表达。本菌株适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。
我司（懋康生物）提供的GV3101(pSoup-p19)化学感受态细胞经特殊工艺制作，基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline (pSoup-p19-tetR)，经pGs2质粒（卡那mei素抗性）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
产品组分：
组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
MF2469-1000UL | MF2469-5000UL | ||
MF2469-A | GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2469-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，一年有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
4） 为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
5） 转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。
6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。
7） 利fu平浓度应≤25μg/ml，过高浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
8） 培养基中加入利fu平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链mei素或庆大mei素可防止Ti质粒丢失，但链mei素不利于农杆菌的转基因操作，一般培养农杆菌时不考虑链mei素或庆大mei素，因Ti质粒丢失的概率极低（基本可以忽略）。
9） GV3101(pSoup-p19)感受态细胞虽具有四环素抗性，但在转入目标质粒涂板筛选阳性克隆时，只需加入目标质粒抗性的抗生素，不用加四环素。
10） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完quan融化。
2) 往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于10μl）质粒DNA（注意：转化效率较高，第一次使用前建议做预实验确定适宜的质粒量），用手拨da管底使其混匀，依次于冰上静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。
3) 加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3h。
4) 6,000rpm离心1min，留取100μl左右上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。
【注意】：当平板只含50μg/ml卡那mei素时，28℃培养48h即可；当平板中同时加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平时，需28℃培养60h；若使用的平板含50μg/ml利fu平，需在28℃培养72-90h。
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MF3732-2UG | pGreenII 0800-Luc Plant Expression Vector植物表达载体 | 2μg |
MF3733-2UG | pGreenII 62-SK Plant Expression Vector植物表达载体 | 2μg |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0020-25G | Tetracycline Hydrochloride, USP Grade盐suan四环素 | 25g |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫suan链mei素 | 25g |
MX7401-500G | Agar, Gel Strength＞1200 g/cm2琼脂粉（植物组培级） | 500g |
MS0006-30ML | Plant Preservative Mixture (PPM)植物组培抗菌剂 | 30ml |
附表1固体和液体LB培养基配方
组分Component | LB（液体）/升 | LB（固体）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化钠NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表2固体和液体YEB培养基配方
组分Component | YEB（液体）/升 | YEB（固体）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫suan镁MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表3常见农杆菌对抗生素敏感性总表
农杆菌菌株 | 羧苄（carb） | 链mei素（strep） | 利fu平（rif） | 庆大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信"的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
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