SYBR 14 绿色荧光核酸细胞染色

SYBR 14 Nucleic Acid Stain (5mM)

绿色荧光核酸染料

产品信息

产品描述

SYBR 14核酸染料（SYBR 14 Nucleic Acid Stain）通常用来监测精子活力，通过联合SYBR 14和碘化丙啶（PI）的双染方式能评估精液中的活精子占比。SYBR 14是一种核酸染料，与DNA结合后的吸收波长是488nm，发射波长是518nm。SYBR 14将活精子的核染成明亮绿色，反之，PI仅将丧失膜完整性的无运动精子染成红色。活/死精子的占比通过先用SYBR/PI染色，之后再用流式分析染料摄取的方法进行判断。

本品以DMSO储存液形式提供，浓度为5mM。只需用合适的生理缓冲液稀释到工作浓度进行简单孵育即可，适用于哺乳动物精液样本。

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 再次冻存本品前务必拧紧盖子，管子建议直立保存。

2） 目前没数据表明该探针具致畸性或毒性。由于该探针与核酸结合，可能被当作一种潜在的突变剂，需做适当的防护措施。由于DMSO能促进有机分子进入组织，此储存液在使用的过程中务必妥善操作。根据当地的政策来处理使用本品后的废液。

3） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

染色流程

1. 工作液的准备

1.1 初次使用，将低温保存的SYBR 14（5mM）从冰箱取出，置于室温或25℃温育至少30min，使其充分融化。按照单次用量分装后，置于≤-20℃避光干燥保存。

1.2 于正式使用前，用合适的生理缓冲液稀释SYBR 14（5mM）到10-20µM的工作液。

2. 染色流程

以下染色流程仅用作基本参考。试剂浓度必须根据精液来源、精子密度以及样本内的其他材料来进行优化调整。

2.1 用含10% BSA的HEPES缓冲盐溶液（10mM HEPES, 150mM NaCl，10% BSA，pH 7.4）稀释样本（比如：精液样本）

2.2 取5µl步骤1.2新鲜制备的SYBR 14工作液，加入1ml稀释样本中。

2.3 37℃孵育5-10min。

2.4 用荧光显微镜（FITC滤片）或流式细胞仪（488nm激发器，530/30nm滤片）进行样本分析。

染色示例

文献来源：Anna Dziekońska et al. Fluorescence Microscopy and Flow-Cytometry Assessment of Substructures in European Red Deer Epididymal Spermatozoa after Cryopreservation. Animals 2023, 13(6), 990

实验目的：精子活力（Sperm Motility）

实验步骤j：用SYBR-14和碘化丙啶（PI）评估活力（质膜完整性）。稀释精子样本（200µl）加入2µl SYBR-14（1mM）和2µl PI（2.4 μM in Tyrode’s salt solution），37℃避光孵育10min。分别观察带绿头的精子（SYBR-14+/PI−，具完整膜结构的活精子）和带红头的精子（死精子）。

实验步骤k：为了评估质膜完整性，精子用SYBR-14和碘化丙啶（PI）染色。稀释样本（500µl）用3µl SYBR-14（1mM）和3µl PI（2.4 μM in Tyrode’s salt solution）染色。带绿色荧光的SYBR-14阳性精子和PI阴性精子被分类为具完整膜结构的活精子细胞。

染色图片（流式）：

Fig 1：(A) Sperm viability (SYBR+/PI−). (B) Cytogram of a SYBR-14/PI stain.

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