Chemically 大肠杆菌 生化试剂

TG1 Chemically Competent Cell  

大肠杆菌化学感受态细胞

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菌株描述

TG1来源于E. coli K-12菌株，是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株。F′附加体上的lacIq的存在使其能严谨型调控表达含大肠杆菌启动子（由lac操纵子序列控制，比如：T5，trc，tac）的载体。TG1是常用的噬菌体展示用菌株，也适用于普通质粒的构建，lacIqZΔM15的存在使其可用于蓝白斑筛选等实验。

TG1菌株基因型：F’ [traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15] supE thi-1 Δ(mcrB-hsdSM)5(rK-mK-) Δ(lac-proAB)

产品描述

本品是大肠杆菌TG1菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最*-低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。

7） TG1菌株不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，质粒提取时，推荐使用质粒提取试剂盒中的去蛋白液，为求去除菌体内大量的核酸酶。

8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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