超敏型ECL化学发光显色试剂盒免疫学分析

SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit

超敏型ECL化学发光显色试剂盒

产品信息

产品描述

超敏型ECL化学发光显色试剂盒（SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit）是灵敏的、基于鲁米诺的新一代增强型化学发光HRP底物，通过Western Blot能实现低皮克级的蛋白检测。

超敏型ECL化学发光显色试剂盒特别设计专为使用HRP偶联的Western Blot实验提供*的信号和低皮克灵敏度。其发光强度和好的的信号持续允许多次曝光，更容易收集到发文质量的印记图像。本品能兼容各种印迹膜、封闭液和大量的抗体稀释液，能够满足绝大部分的Western blot应用需求。

超敏型ECL化学发光显色试剂盒的检测灵敏度和使用方法类似于Thermo Scientific™的SuperSignal™ West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate，具有以下*的特征：

• 低皮克级灵敏度：检测NC膜或PVDF膜上低皮克级的蛋白条带；

• 长信号持续时间：在优化条件下，经底物孵育的印迹条带能持续输出6~8h的可检测光信号；

• 试剂稳定性高：工作液在8h内稳定，试剂盒在4℃可稳定放置1年；

• 经济实惠：对稀释抗体浓度进行优化

﹒0.2~1.0µg/ml一抗（从1µg/ml储存液稀释1:1,000~1:5,000倍）

﹒10~50ng/ml二抗（从1µg/ml储存液稀释1:20,000~1:100,000倍）

产品组成

注意事项

1） 为获得醉加实验效果，应注意优化实验条件，包括样品用量、凝胶类型、转膜方法、膜的类型、封闭液、洗涤液、一抗/二抗稀释度以及孵育时间等。

2） 洗涤液、封闭液、抗体稀释液、SuperSignal ECL工作液应足量使用，确保印迹膜处于湿润状态。

3） 为获得醉加实验效果，孵育过程中使用摇动或摆动工作台。

4） 缓冲液中避免使用叠氮钠作为防腐剂，因其会抑制HRP活性。

5） 使用亲和素/系统时，应避免使用脱脂奶粉的封闭液。

6） SuperSignal ECL A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头，上述试剂相互污染后会导致SuperSignal ECL A液和B液逐渐失效，影响后续的使用效果。

7） SuperSignal ECL A液和B液使用后，请盖紧瓶盖以防失效， 特别是B液含有氧化剂，比较容易被还原而失效。

8） SuperSignal ECL荧光持续时间很长，但开始反应后的30min内荧光更强一些，随后荧光会逐渐减弱，因此请注意充分利用这荧光较强的30min进行曝光或成像仪检测。

9） SuperSignal ECL工作液室温能稳定保存8h，暴露在阳光或其他强光下都会破坏工作液。短期暴露在实验室光线下不会破坏工作液。

10） SuperSignal ECL A液和B液均对人体有害，操作时请注意适当防护。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

需要自行准备材料

• Western Blot印迹膜：用合适方法电泳分离蛋白，并将这些蛋白转移到所需的印迹膜上。

• X光片或成像仪

• 旋转或摇摆平台振荡器：孵育过程中用于膜的摇动。

• 稀释液、洗涤液、封闭液

• 一抗、HRP标记的二抗

• 用于X光片曝光用的暗盒、显影和定影液

Western Blot操作步骤

【注意】：为获得醉加实验效果，应注意优化整个实验过程中的组分和步骤。

1） 将印迹膜从蛋白转印仪中取出，加入合适的封闭液在室温下孵育20~60min，保持振荡，以封闭膜上非特异性蛋白结合位点。对于一些背景较高的抗体，可以在4℃封闭过夜。

2） 将印迹膜从封闭液中取出，加入一抗工作液中室温或4℃孵育1h，保持振荡。如果一抗孵育1h效果不佳，可在4℃孵育过夜，保持震荡。或根据一抗说明选择适当的孵育温度和时间。

3） 将足量的洗涤液加入膜上，保证*覆盖膜。振荡孵育≥5min，更换洗涤液并重复该步4~6次。增加洗涤液体积、洗涤次数和洗涤时间有助于降低背景信号。

4） 将印迹膜加入HRP标记的二抗工作液中，室温孵育1h，保持振荡。或根据二抗说明选择适当的孵育温度和时间。

5） 重复步骤3），充分洗涤以去除未结合的HRP标记二抗。

6） 用镊子将膜轻轻取出，用吸水纸略吸去过多的液体（勿接触膜的蛋白面），然后置于一洁净保鲜膜或恰当容器上。

7） 配制SuperSignal ECL工作液：根据需要量，取A液和B液等体积混合即为SuperSignal ECL工作液，室温放置备用，工作液宜在临检前配制。

8） 根据膜的大小，按每10cm²膜加1ml SuperSignal ECL工作液的比例，滴加SuperSignal ECL工作液到膜上，确保工作液均匀覆盖在膜上，孵育5min。

9） 从工作液中取膜，弃SuperSignal ECL工作液，用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间（避免膜与膜之间产生气泡），随后进行压片检测或成像仪检测。

① 压片检测：a）将膜固定于胶片暗盒片夹内，蛋白面朝上，除适用于胶片曝光用的灯（如红灯）之外，关闭所有的灯。b）将X光片置于膜的上面，建议一次曝光1min，立即显影定影，根据结果再调整曝光时间，或直接分别曝光1，3，5min，然后一起显影定影观察结果。化学发光反应在底物孵育后的前5-30min是醉强烈的，这一反应可持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间才曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。

11） 采用荧光成像仪检测：将膜放置到荧光成像仪内，参考仪器说明书进行检测。

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信"的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

超敏型ECL化学发光显色试剂盒免疫学分析

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