pH荧光探针

BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

pH荧光探针

产品关键词

BCFL AM; BCECF, AM；Dual-excitation ratiometric pH indicator 双激发光比率型pH荧光探针；SBFI AM ( Na⁺ Indicator)；Fluo-8, AM； 

产品信息

产品描述

BCFL AM是一种细胞膜渗透性的荧光探针，用来测定相对的胞内pH变化。是常用的比率型pH探针-BCECF（2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein）的*替代物。与BCECF不同（至少由三种异构体构成的一种复合物，不同异构体之间的比率因批次而异），BCFL是单一异构体，具有更好的的结果重复性。BCFL具有与BCECF相同的光谱反应（单波长测定λex/λem=490/535nm；或比率测定λex/λem=505/ 535nm和λex/λem=430/535nm）（光谱特征见附录I）。BCFL AM表现出pH依赖的双激发性，pKa~7.0，以及一个激发交点（454nm）。BCFL AM的比率型成像使得胞内pH测定基本不受几种可变因素的影响，包括染料浓度、光径、细胞泄露和光漂白率。

产品特性

1） 同义名：BCFL AM ester; BCFL Acetoxymethyl Ester;

2） 分子量：~600

3） 溶解性：溶于DMSO

4） Ex/Em：503/528nm

注意事项

1）荧光染料都存在淬灭问题，操作或保存过程中尽量避光，减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A、试剂准备

1. 10% Pluronic F-127母液配制【可选】

a）将1g Pluronic F-127（货号：MS4301-1G）溶于10ml去离子水，配制成10%（w/v）母液。

b）溶解过程中于40~50℃内加热10% Pluronic F-127母液30min，使其*溶解。

c）10% Pluronic F-127母液室温保存，高达6个月稳定，不要冻存。

2. HHBS Buffer（货号：MS3510-500ML）或其他生理缓冲液

3. 丙磺舒（货号：MZ8471-1G）或水溶性丙磺舒（货号：MZ8472-154MG）【可选】

B、操作步骤

【注意】：以下实验步骤中用到非离子表面活性剂Pluronic F-127和有机阴离子转运抑制剂丙磺舒（Probenecid），这两种试剂虽然都是非必需的，但强力推荐使用。

1. 制备BCFL AM母液：于实验前，将低温保存的BCFL AM粉末（Mw：~600）置于室温回温至少20min。低速离心后加入高质量无水DMSO配制成10~20mM母液。比如：1mg BCFL AM粉末加入166μl DMSO充分溶解，混匀后即得到10mM母液。多余的母液根据单次用量分装，避光冻存，约3个月稳定

2. 用HHBS或其他的生理缓冲液制备2×工作液（含10μM BCFL AM和0.08% Pluronic F-127），比如，在合适的管子内混合6.4μl BCFL AM（10mM 储存液）和51.2μl 10% Pluronic F-127。之后，添加HHBS或其他生理缓冲液直到总体积为6.4ml。

【注意】：对于大部分的细胞系，建议BCFL AM的工作浓度为4~5μM。Pluronic F-127的终浓度建议为0.02~0.04%。

3. 吸取100μl 2×工作液到含100μl 细胞培养基的培养孔内，混匀，使得BCFL AM的终浓度为5μM和Pluronic F-127的终浓度为0.04%。

4. 置于37℃孵育30~60min。之后置于室温孵育30min。

5. 吸走200μl染色液，之后重新加入含1mM丙磺舒的HHBS Buffer或其他生理缓冲液。

6. 添加化合物到检测孔内。之后通过荧光检测来进行pH分析。【单波长检测：Ex/Em=490/535nm（cutoff=515nm）；或比率测定Ex/Em=505/535nm和430/535nm（cutoff=515nm）】

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附录 BCFL探针pH依赖性的光谱特征。A）吸收光谱；B）发射光谱；C）激发光谱；图A）表明BCFL在pH4.5-9.0范围内的吸收光谱往红光迁移（450nm→505nm），且摩尔吸光系数增加到约90,000 cm^-1M^-1，反映了BCFL具pH敏感性的吸收特征。图B）表明BCFL在生理pH6-8范围内的发射光谱。与BCECF相似，BCFL在生理范围内的发射波长为526nm。图C）说明BCFL作为双激发比率型pH指示剂，具有激发等消光点（430nm）。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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