Coelenterazine Native 天然腔肠素
简要描述:
Coelenterazine Native 天然腔肠素(CTZ-Native)是自然界中存在较丰富的一种腔肠素,也是目前应用较普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白(APO)的底物,也是海肾荧光素酶(Rluc)和分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)等荧光素酶的作用底物。
产品时间:2024-08-06
Coelenterazine Native 天然腔肠素
产品关键词:
Coelenterazine (CTZ) 天然腔肠素;海肾荧光素酶(Rluc);分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc);萤火虫荧光素酶(Fluc);In vivo bioluminescence imaging 活体动物体内成像技术;CAS NO:50909-86-9;
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Coelenterazine Native 天然腔肠素 | MX4606-500UG | 500μg | 598 |
Coelenterazine Native 天然腔肠素 | MX4606-1MG | 2×500μg | 1028 |
Coelenterazine Native 天然腔肠素 | MX4606-5MG-A | 10×500μg | 4368 |
Coelenterazine Native 天然腔肠素 | MX4606-5MG-B | 5mg | 3758 |
Coelenterazine Native 天然腔肠素 | MX4606-10MG | 10mg | 6258 |
【温馨提示】:见我司懋康生物(maokangbio)提供的活体成像底物-腔肠素及衍生物产品专题。
产品描述
腔肠素(Coelenterazine)是在水生生物中发现的一种发光基团(luminophore),是许多荧光素酶的作用底物,包括海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase, Rluc),分泌型膜锚定荧光素酶(Gaussia luciferase, Gluc)和薮枝虫荧光素酶(Obelia luciferase),和发光蛋白包括水母发光蛋白(Aequorin)的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶,在含分子氧的条件下,氧化腔肠素产生高能量的中间产物,在此过程发射蓝色光,光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶(FLuc)系统不同,其在含分子氧的条件下,还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光,光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异,RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究,或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛,包括:1)活细胞或组织的钙离子检测;2)细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子(活性氧,ROS)化学发光检测;3)基因报告基因检测;4)动物活体检测;5)ELISA和生物发光共振能量转移(BRET)用于蛋白相互作用研究;6)药物高通量筛选(HTS);
图1. 海肾荧光素酶(Rluc)催腔肠素发光的反应流程
天然腔肠素(Coelenterazine Native,CTZ-Native)是自然界中存在丰富的一种腔肠素,也是目前应用普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白(APO)的底物,也是海肾荧光素酶(Rluc)和分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度,后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET,细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平(ROS)的化学发光检测等。
产品特性
1) CAS NO:55779-48-1
2) 化学名:8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one
3) 同义名:Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; native-CTZ; 腔肠素游离酸;
4) 分子式:C26H21N3O
5) 分子量:423.46 g/mol
6) 纯度:>95%
7) 外观:黄色至棕黄色结晶性粉末
8) 溶解性:溶于甲醇或乙醇,不要溶于DMSO
9) 化学结构式:
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤
一、 腔肠素工作液制备
【有关腔肠素溶解的注意事项】:
1) 腔肠素溶于甲醇或乙醇,不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低,一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液,然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作浓度,现配现用。
2) 腔肠素在溶液中的稳定性比较低,号于正式实验前才配制溶液(包括高浓度母液)。但若实际要求,必须保存母液,目前来说稳定的溶剂是丙二醇,往内加入少量L-抗坏血酸,β-巯基乙醇,DTT,DTE,或少量HCl能维持其还原态。不过,还原剂可能会减低氧化腔肠素(氧化为Coelenteramide)的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀,实际取决于溶液浓度。当然,可通过加热50-60℃,使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀,或在实验前(特别是活体动物实验)离心去沉淀。
1.1 腔肠素母液制备
1.2 腔肠素工作液制备
二、 操作方法
2.1 体外生物发光
2.2 体内动物成像
【注意】:腔肠素的注射剂量可能根据动物类型、品种、注射方式以及报告基因种类有所差异。加的注射剂量请自行摸索或参考文献来做。
对于海肾荧光素酶报告基因系统,通过腹腔(IP)或静脉注射(IV)按照25-100μg/只小鼠能得到良好结果。对于分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)报告基因系统,由于分泌型膜锚定荧光素酶代谢活性增加,相对来说需要更高量的腔肠素。文献(Tannous BA. Gaussia luciferase reporter assay for monitoring of biological processes in culture and in vivo.Nat Protoc.2009;4(4):582-591.)提到,当用静脉注射(IV)按照4mg/kg体重给药能得到良好结果。
a)根据自身实验室条件选择适当方法麻醉动物,视情况决定是否去皮(通常黑色皮毛动物需去皮)。
b)根据实际情况往动物体内注射相应剂量步骤1.2 配制好的腔肠素工作液。比如,对于海参荧光素酶报告基因系统,使用26-gauge针头注射器尾静脉注射100µl 2 mM (~1mg/ml)腔肠素工作液,然后立即对动物进行体内成像检测,以获得峰值信号。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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