DirectPCR Lysis Reagent Cell 细胞DNA提取
简要描述:
DirectPCR Lysis Reagent Cell 细胞DNA提取:DirectPCR 不仅介导生物样品的快速裂解,而且含有抑制剂,能够有效抑制PCR扩增用粗提裂解物中存在的抑制效应,同时*保持释放出来的基因组DNA的完整性。
产品时间:2024-03-21
DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 细胞直接PCR裂解液
【单瓶试剂,细胞裂解+PCR一步到位】
产品关键词:
Viagen Biotech; DirectPCR® 直接PCR;PCR genotyping 基因分型;Proteinase K蛋白酶K;302-C (301-C);
产品介绍:
Viagen DirectPCR® DNA Extraction System(DirectPCR® DNA提取系统)是一种单管系统,用于从小鼠尾巴,耳片,卵黄囊和培养细胞内快递制备DNA。Viagen Biotech, Inc科学家开发的组分(正在申请)允许用DirectPCR® DNA Extraction System获得的DNA提取物与基因分型用的基因组PCR兼容。生物样本的粗提物与许多分子生物学级的试剂比如PCR都难以兼容,部分原因在于粗提物内含有抑制剂。DirectPCR®不仅介导生物样品的快速裂解,而且含有抑制剂,能够有效抑制PCR扩增用粗提裂解物中存在的抑制效应,同时zui大程度保持释放出来的基因组DNA的完整性。申请中的DirectPCR®操作起来,*消除任何溶液转移或开管步骤,根本上节省了大量时间和精力。
产品特点:
1) 省时:更少的动手时间;尾巴裂解液粗提物即可用于PCR;
2) 省钱:仅需成本的反应流程;
3) 安全:无有机试剂;
4) 环保:更少消耗(有机试剂,管子,枪头等等)
5) 可靠有效:100%成功率保证高产量
详细流程:
1) 10cm细胞培养板细胞,使用添加新鲜制备的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K的200-300μl DirectPCR® Lysis Reagent (Cell) 细胞裂解液重悬细胞。蛋白酶K在DirectPCR®中稳定保存~24h。如果处理少量细胞,会很难称量蛋白酶K酚末,可直接使用Viagen提供的基因组PCR级的蛋白酶K溶液(Cat#501-PK),使用浓度为0.5-1.0mg/ml(每1ml DirectPCR®中加入25-50μl蛋白酶K溶液)。【注意】:若使用小量细胞,可用去离子水稀释DirectPCR®高达10倍,然后使用合适更多体积的裂解液用于PCR。见表1,DirectPCR® Lysis Reagent (Cell) 起始使用条件。
2) 置于旋转杂交炉中,55℃转动管子处理5-6h或直到看不见组织团。若有必要,能过夜裂解样本,不会影响效率。*裂解至关重要。要想获得更具有重复性的结果,中途摇动一下瓶子以更换管子的位置一次,在处理2-3h之后。
3) 水浴锅内85℃孵育粗提液45min。【可选】于步骤4)前离心10s沉淀毛发。粗提液可置于-20℃保存1年(或4℃保存1周),不会降低效率。
4) 每50μl PCR反应体系加入0.5-1.0μl裂解液。推荐PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。
表1,DirectPCR® Lysis Reagent (Cell)起始使用条件。
plate (# cells) | Tube size (ml) | DirectPCR-Cell (μl) | Dilution (fold) | Lysates (μl)/50μl PCR rxn |
96 well* | 0.75 | 50-70 | 1 | 1-1.5 |
96 well** | 0.75 | 60-80 | 2 | 2-3 |
24 well* | 0.75 | 70-100 | 1 | 1-1.5 |
6 well* | 0.75 | 100-140 | 1 | 1-1.5 |
10cm* | 1.5ml | 200-300 | 1 | 1-1.5 |
* Lysis using rotation hybridization oven.
** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted. Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs. Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.
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品牌 | 名称 | 货号 | 规格 |
Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell) | 301-C | 50ml |
Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell)) | 302-C | 100ml |
Viagen Biotech | Genomic PCR Grade Proteinase K Solution | 501-PK | 5ml |
DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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