SURE化学感受态细胞（热激法）

SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats 正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；Stratagene;

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产品组分：

菌株描述

SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司开发，特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌菌株中“无法克隆”的某些DNA段。SURE菌株破坏了重组酶系统整条通路上的组分，这些组分能催化重组和删除体内的非标准二级和三级结构，包括十字形（由反向重复序列引起）和Z字形的DNA，经常出现在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆进入传统大肠杆菌菌株中。SURE含限制缺陷（McrA^-, McrCB^-, McrF^-, Mrr^-, HsdR^-），使其无法对外源DNA进行标记和限制，从而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含内切酶缺陷（endA），和重组缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacI^q ZΔM15使菌株适用于蓝白斑。菌株本身含卡那霉素（Kan^R）和四环素（Tet^R）特性。

SURE菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].

产品描述

本品是SURE菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   zui号在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低zui终用于涂板的菌量。

5）   菌株本身含卡那霉素和四环素特性，携带此两种抗性的质粒不适合克隆到SURE细胞。当携带抗霉素抗性基因（Cam^R）的质粒转化进入SURE细胞，使用添加100μg/ml氯霉素的LB固体平板来筛选克隆子。SURE细胞本身能耐受＜40μg/ml氯霉素，但对100μg/ml 氯霉素很敏感。

6）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到zui低。

7）   采用常规操作流程转化SURE感受态细胞，转化效率可达5×10⁸ cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高，可使用标准操作流程。

8）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常规操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

标准操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管， 42℃预热SOC培养基。

2）   从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其*融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。

3）   加1.7μl β-ME（1.42M）到细胞内。【β-ME能提高转化效率】

4）   轻弹管子。置于冰上孵育10min，每2min轻弹混匀细胞一次。

5）   往细胞内加入0.1-50ng目的DNA，轻弹混匀细胞，冰上静置孵育30min。

6）   42℃热激45s，热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min，此过程不要摇动离心管。

1）   向每个离心管中加入900 μl预热的无菌SOC培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，225-250 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

2）   吸取≤200 µl 转化菌液，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上（若需要颜色反应，平板含IPTG+ X-gal），用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。【注意：若是进行蓝白斑筛选，37℃至少培养17h，使得颜色能生成。另外将平板置于4℃孵育2h，能加强颜色反应。】

附表1 固体和液体LB培养基配方

附表2 固体和液体2-YT培养基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

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