EHA101农杆菌化学感受态细胞​

EHA101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

产品标签：

EHA101菌株；农杆菌感受态细胞；Rifampicin（Rif） li福平；Kanamycin（kan）卡那mei素； EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物转基因研究；

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产品描述：

EHA101菌株的染色体背景为C58，核基因含li福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101（pTiBo542DT-DNA），此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA101（pTiBo542DT-DNA）质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。pEHA101（pTiBo542DT-DNA）质粒携带筛选标签kan，赋予EHA101菌株卡那mei素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。

我司提供的EHA101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型为C58 (rif^R) Ti pEHA101 (pTiBo542D T- DNA) (kan^R) Nopaline，经pK7WGF2质粒（壮观mei素抗性）检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

根癌农杆菌介导的转化原理：

根癌农杆菌能在自然条件下趋化性的感染大多数双子叶植物或裸子植物的受伤部位，诱导产生冠瘿瘤。诱发冠瘿瘤的原因在于根癌农杆菌Ti质粒上的T-DNA含8个左右的基因能在植物细胞内表达，指导合成一种非常特殊的化合物冠瘿碱，进而引发转化细胞癌变；根癌农杆菌Ti质粒（150～200kb）上的一段T-DNA，随着农杆菌侵染植物伤口进入细胞后，T-DNA脱离质粒并整合到植物基因组。因此，将外源基因插入到改造的T-DNA中，借助农杆菌的感染作用，从而达到将外源基因转化并整合进入受体植物的目的。

Ti质粒的类型：

根据根癌农杆菌诱导的植物冠瘿瘤中所合成的冠瘿碱种类不同，Ti质粒可分为4种类型：章鱼碱型(octopine)、胭脂碱型(nopaline)、农杆碱型(agropine)、农杆菌素碱型(agrocinopine)或称为琥珀碱型(succinamopine)。章鱼碱和胭脂碱是由氨基酸衍生的冠瘿碱，而农杆碱和农杆菌素碱是属于单糖衍生的冠瘿碱。各种不同类型的Ti质粒都具有控制肿瘤诱发的且物理位置彼此相邻的T-DNA区和毒性区(Vir区)，它们约占Ti质粒DNA总长度的1/3。

产品组分：

注意事项

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其*融化。

2)        往100μl感受态细胞悬液中加入1μg（体积不大于10μl）目的DNA，用手管底使其混匀，依次于冰上静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3)        加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2-3h。

4)        6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

【注意】：当平板只含转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48h即可；当平板中加入双元载体抗生素的同时，再加入20μg/ml li福平时，需28℃培养60h；若使用的平板含50μg/ml li福平，需在28℃培养72-90h。

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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