Nitrocefin 头孢硝噻吩

Nitrocefin 头孢硝噻吩保存与运输方法

　　保存：-20°C避光保存，储存于惰性气体下。至少2年稳定。

　　运输：冰袋运输。

　　使用方法

　　1. 头孢硝噻吩储存液(10mg/ml)制备

　　a)使用前从冰箱内取出产品置于室温回温至少20min并进行低速离心;b)吸取100μl高质量DMSO加入1mg头孢硝噻吩，充分溶解并混匀。可按照单次用量分装后，-20°C避光保存。

　　2. 头孢硝噻吩工作液(1mg/ml)制备

　　头孢硝噻吩的典型工作浓度为0.5-1.0mg/ml，此制备物一般呈黄色。

　　取20μl头孢硝噻吩(10mg/ml)储存液加入180μl

　　PBS缓冲液(0.1M，中性pH)，混匀后，即得到头孢硝噻吩(1mg/ml)工作液。多余的工作液可置于-20°C避光保存，必须在2周用完。

　　3. 快速检测分析

　　一旦接触β-内酰胺酶产生菌，待检样本一般可快速产生阳性反应。通常建议20-30min的反应时间，同时设置阴性对照。

　　3.1 玻片表面分析法

　　a)吸取一滴头孢硝噻吩工作液(1mg/ml)到干净的玻璃载玻片表面;b)使用无菌接种环挑取一固体培养克隆，并与液滴混匀;c)若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。【若有必要，可多滴头孢硝噻吩工作液，防止干燥】

　　3.2 直接接触分析法

　　a)直接吸取一滴头孢硝噻吩工作液(1mg/ml)到分离菌落表面;b)若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。

　　3.3 肉汤培养液分析法

　　a)取1ml肉汤培养液，加入3-5滴头孢硝噻吩工作液(1mg/ml);b)若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。

　　3.4 细胞裂解液分析法

　　a)超声裂解1ml细胞悬液;b)加入3-5滴头孢硝噻吩工作液(1mg/ml)到裂解悬液;b)若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。

　　3.5 滤纸分析法

　　a)将一小片滤纸片(~3 x 3 cm)饱和吸收头孢硝噻吩工作液(1mg/ml)，然后置于干净的培养皿内;b)跳取一分离的克隆，并涂抹到浸渍滤纸片上;c)若20-30min内能观察到红色，表明β-内酰胺酶活性。

　　注意事项

　　为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Nitrocefin 头孢硝噻吩简介

头孢硝噻吩(Nitrocefin，CAS NO：41906-86-9)，具有显色特性的一种头孢菌素(cephalosporin)，通常用来检测由β-内酰胺类抗生素耐药菌代谢产生的β-内酰胺酶(beta-lactamases)活性。作用机制在于：几乎所有β-内酰胺酶能水解头孢硝噻吩β-内酰胺环上羰基碳和氮基间的酰胺键，这一过程通过颜色的变化可用肉眼来判断。

产品特性

　　1. CAS NO：41906-86-9

　　2. 化学名：(6R)-3-[(1E)-2-(2,4-dinitrophenyl)ethenyl]-8-oxo-7R-[(2-thienylacetyl)amino]-5-thia-1-azabicyclo

　　[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid

　　3. 同义名：Nitrocephin

　　4. 分子式：C21H16N4O8S2

　　5. 分子量：516.51

　　6. 纯度：≥95%(HPLC)

　　7. 外观：橘色粉末

　　8. 溶解性：DMSO(30 mg/ml)、DMF(30 mg/ml)