酵母感受态细胞 克隆与表达分析
简要描述：
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析，是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。
产品时间：2024-03-21
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酵母菌化学感受态细胞
产品标签
Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 | MF2352-1000UL | 10×100μl | 290 |
MF2352-5000UL | 50×100μl | 1320 |
产品包装
组分编号 | 组分名称 | 保存 | 货号（规格） | |
MF2352-1000UL | MF2352-5000UL | |||
MF2352-A | Y2HGold Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2352-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2352-C | Carrier DNA (5μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2352-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
产品描述
Y2HGold是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y2HGold-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp1，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y2HGold有四个报告基因：AUR1-C，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个*异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1操控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母双杂交假阳性发生的概率。此外，新报告基因AUR1-C与以往的营养缺陷报告基因相比，具有更低背景，这一优势也可降低酵母双杂交假阳性发生的概率。
本品为经特殊工艺制备的Y2HGold酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。
基因型
MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, GAL2UAS- Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1
注意事项
1. 在冰上融化感受态细胞。
2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
3. Y2HGold对高温敏感，zui适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。
4.菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。
5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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货号 | 名称 | 规格 |
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析
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