X-Gluc 克隆与表达分析

X-Gluc 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸环己胺盐（X-beta-D- glucuronide CHA salt）

——转基因植物zui常用报告基因GUS显色底物，GUS染色定性研究

搜索关键词：β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase，GUS）, 蓝色显色底物, 转基因植物GUS表达, GUS染色（定性）, 报告基因gusA（uidA）, 活性检测,  CAS：114162-64-0

作用机制：

X-Gluc，也称为5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-glucuronide（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸），是β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase，GUS）的显色底物，由一种广泛使用的报告基因gusA（uidA）所编码。GUS水解X-Gluc，生成一种无色的葡萄糖醛酸和一种肉眼可见的氯-溴靛蓝（chloro-bromoindigo）深蓝色沉淀。利用这一特性，X-Gluc常用来检测植物细胞和组织中的GUS表达；另外，X-Gluc还能用来检测大肠杆菌引起的感染状况；或检测食物或水源是否受细菌污染。

主要应用：转基因植物报告基因GUS活性检测，X-gluc用作显色底物。

普遍应用优势在于：绝大多数植物细胞内不存在内源性的GUS活性，而且GUS基因表达产物具有检测方法简单、灵敏度高，易于定量及定性分析，能够与其他蛋白质基因融合等优势，因此，GUS基因为植物工程研究中应用zui广泛的报告基因（报道基因）之一。

1. GUS活性检测（组织化学定位法，定性研究）

GUS催化底物X-gluc在酶活性位点生成深蓝色沉淀，为研究外源基因在植物中表达具体部位研究提供很好的研究手段。且GUS酶和显色产物非常稳定，植物中可以积累。

1. GUS染色液制备【作为参考，可按照具体实验条件来调整】

2. GUS定性染色步骤

1. GUS活性检测（荧光分析法，定量研究）

GUS催化荧光底物MUG 4-甲基伞型酮-beta-D-葡糖苷酸，将其水解为4-MU（4-甲基伞型酮）和β-D-葡萄糖醛酸。4-MU中的羟基解离后在365nm的光激发下产生455nm的荧光。此时用荧光分光光度计测定得到的是相对值，因此同时需要用标准物4-MU进行校准。

荧光定量分析GUS活性有两种基本方法：1）在一个时间点测定GUS酶作用产物的总荧光量，需要设定空白对照，以消除内源荧光强度；2）测定一段时间内GUS的动力学过程。在酶反应初始阶段，酶作用产物与时间呈线性关系，而内源性荧光物质的荧光量与时间无线性关系。由此可计算GUS酶活力。GUS酶活性通常以μg MU/min/mg蛋白质。有时也可以用样本的鲜重来表示。

基本特性：

1. CAS NO：114162-64-0

2. 英文同义名：5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-glucuronic acid, cyclohexylammonium salt; X-beta-D- glucuronide CHA salt; X-Gluc CHA Salt; X-glu CHA Salt; X-glcA CHA Salt; BCIG CHA Salt;

3. 分子式：C₁₄H₁₃BrClNO₇ • C₆H₁₃N

4. 分子量：521.79 g/mol

5. 纯度：＞99%（HPLC）

6. 外观：白色至类白色结晶性粉末

7. 溶解性：DMF、甲醇

8. 化学结构式：

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注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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