化学发光显色试剂盒可用于血清胸苷激酶单克隆抗体酶促化学发光试剂盒的研制
制特异性强、灵敏度高的检测S-TK1(血清胸苷激酶)的单克隆抗体酶促化学发光试剂盒,以用于肿瘤早期检测、预后和术后观察及临床疗效监控。
方法:制备一对抗S-TK1单克隆抗体。1抗体制备A.设计并合成长度为15个氨基酸的S-TK1多肽,并与载体蛋白KLH耦联制备多肽抗原;B.从Raji细胞提取物中纯化获得TK1抗原蛋白;C.抗S-TK1多肽抗原单克隆抗体的制备:常规免疫Balb/c小鼠,选择血清抗体滴度较高的小鼠,取脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选获得7株高亲和力的抗S-TK1多肽的单克隆抗体,用于制备包被抗体;D.抗Raji细胞TK1抗原蛋白单克隆抗体的制备:方法如C,获得3株高亲和力的Raji细胞TK1抗原蛋白单克隆抗体,用于制备检测抗体。
2.抗体鉴定通过对小鼠进行小规模的腹水生产,用蛋白质A亲合柱从每个腹水样本中分离纯化单克隆抗体,经ELISA.免疫印迹法鉴定单克隆抗体效价、特异性、亲和力以及种属交叉反应,最后用旋转瓶培养技术进行抗体生产。
3.制作S-TK1酶促化学发光试剂盒1抗体配对将7株高亲和力的抗S-TK1多肽的单克隆抗体和3株高亲和力的Raji细胞TK1抗原蛋白单克隆抗体配对,用ELISA进行测试。标记抗体使用辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)标记检测抗体。
化学发光法试剂盒工作参数的确定以鲁米诺、吐温-20为化学发光底物;经比较确定包被抗体和检测抗体的稀释度;包被抗体即用稀释的抗体加在酶标板上4℃温育过夜,之后洗涤,干燥过夜,用透明胶带封存。