酵母,如酿酒酵母、裂殖酵母和毕赤酵母,通常用于生物学实验研究。酵母是易于培养的单细胞真核生物,他们的基因和蛋白质与哺乳动物具有很好的相似性,所以是好的生物模型。
酵母细胞用于研究基因功能,蛋白质相互作用,细胞通路等,也是大规模异源蛋白表达和小分子生产的宿主,在发酵,酿造和制药行业等起着*的作用。涉及酵母的常见的实验有酵母双/三杂交系统,突变体筛选库和同源重组,等等。
关于冷冻保护剂
甘油和二甲亚砜(DMSO)是常见的细胞可透过性冷冻保护剂,用于准备感受态细胞。它们穿透细胞,防止冰晶的形成,冰晶可能会在冻结过程中导致膜破裂。甘油和DMSO也有一定的缺点,他们可能会导致细胞毒性,特别是在解冻过程中。
非细胞透过性的试剂如蔗糖和海藻糖等也可用于替代物。山梨糖醇钙也是一个好的冷冻保护剂,尤其适用于电穿孔制备感受态细胞。
酵母感受态细胞的储存
每次转化时使用新鲜的感受态细胞是明智的,因为长时间储存,转化效率会降低,但这并不总是可行的。
感受态细胞可以存储在-80°C长达一年,没有转化潜能的损失。然而,瞬间冻结在液氮或-80°C冰箱是不建议的。感受态细胞需要在冷冻保护剂中,像哺乳动物细胞一样缓慢地冷冻。
1. 使用硬纸板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等储存。
2. 用纸片等将盒子里的细胞管隔开,分成多个小格子。
3. 复苏过程中,在37°C解冻细胞,转化前用丰富培养基清洗防冻剂。