对潮霉素B Hygromycin B的抗性基因：
对潮霉素B的抗性源自编码潮霉素B磷酸转移酶(Hph)的基因。至今发现两种来源：
1.Streptomyces hygroscopicus产生的Hph抗性基因;
2.Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae内质粒携带的Hph抗性基因(常用);
潮霉素B Hygromycin B的生物应用：
1) 筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞);
2) 由于作用模式的差异，常与G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和blasticidin S联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株;
3)抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效;
4)作为驱虫药加入动物饲料;
应用浓度：
潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化。推荐使用浓度为50-1000 μg/mL，浓度需要杀灭曲线来确定。
哺乳动物细胞·200-500 μg/mL;细菌/植物细胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000 μg/mL;
潮霉素B Hygromycin B的两种使用方法如下：
使用一：杀灭曲线确定杀死浓度(仅作参考，因个人检测体系而异)
(1)往组织培养级的96孔板内加入未转染细胞，细胞密度约50-200细胞/孔;细胞贴壁之后，往每孔加入含不同浓度(如50-1000μg/mL，至少5个浓度)潮霉素B的200μL新鲜培养基;
(2)37℃，5% CO2培养箱孵育细胞10-14天;
(3)培养5-7天后更换新的培养液，培养液内含有相应浓度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用细胞增殖方法如MTT，CCK-8等评估细胞活力;也可以通过检测细胞克隆数或百分比汇合率来确定毒性效应。一般选择在10-14天能够杀死所有细胞的小浓度为筛选浓度。
使用二：筛选稳定转染细胞
(1) 对于贴壁细胞，直接吸去60mm培养皿内的转染细胞培养基，然后加入含有潮霉素B的新鲜培养基5-6ml;对于悬浮细胞，无菌条件250x g,离心10min除去旧的转染细胞培养基，然后悬浮在约5ml的含潮霉素B的新鲜培养基;
(2) 5-7天后，如上方法更换含有潮霉素B的新鲜培养基;
(3) 再孵育细胞5-7天;
(4) 10-14天孵育后，培养体系中只含有能够表达潮霉素B抗性表型的活细胞。因此筛选之后如步骤一，更换不含潮霉素B的新鲜培养基。