Benzonase Nuclease 核酸酶/广谱核酸酶
（酵母重组表达，无细菌内毒素残留，无蛋白酶污染）
产品关键词：
Benzonase Nuclease 核酸酶（广谱核酸酶）；粘质沙雷氏菌（Serratia Marcescen）；非特异性核酸内切酶；RIPA裂解液；DNA/RNA降解；CAS：9025-65-4；
基本描述：
Benzonase，中文名核酸酶，或广谱核酸酶，一种源于粘质沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又称为灵杆菌）的非特异性核酸内切酶，由两个*一样的亚基构成，每个亚基大约30kDa，含有245个氨基酸和两个必需的二硫键。可以切割和降解各种形式的DNA和RNA（单链，双链，线性，环状，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5个寡核苷酸残基片段，并且在很多种操作条件下有效。对核酸碱基序列无特异性要求，可在链内任意核苷酸间进行切割，广泛用于去除生物制品中的核酸。
主要应用：
1、科研研究中，作为培养细胞上清和细胞裂解液去粘度的酶制剂，去除核酸干扰提高后续蛋白纯化
或功能研究；
2、用在生化分析样品制备——ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程，使用本品benonase处理
含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，以及提高回收率。
3、疫苗工业、蛋白和多糖类制药工业，去除宿主核酸残留，使得疫苗和蛋白类核酸污染显著降低至皮克
级别，提供生物功效。
4、防止细胞凝聚（Cell clumping），特别是融化冻存的细胞样品时；
应用优势：Benonase不仅无蛋白酶活性，而且不会对健康细胞的生长造成干扰。应用背景：全血来源的外周血单个核细胞（PBMCs）在疫苗研究中具有重要的应用价值，比如，定量疫苗诱导的T细胞反应。T细胞反应实验zui初要求新鲜分离的细胞从而达到zuijia的检测信号，这给大规模的实验中对样本处理提出严格的操作限制。然而，冻存PBMCs（尤其是从冻存血液中分离出的PBMCs）一旦融化非常容易聚集到一起，影响后续的分析。
应用示例：Smith JG et al.研究显示Benonase（≥50 U/ml）加入PBMC融化缓冲液中有效预防细胞凝聚，从而使得PBMC冷冻保存的应用成为可能。【文献来源：Smith JG et al. Development and validation of a gamma interferon ELISPOT assay for quantitation of cellular immune responses to varicella-zoster virus. Clin Diagn Lab Immunol. 2001 Sep;8(5):871-9.】
Fig. 2. Comparison of results with frozen PBMCs isolated from freshly collected blood versus blood stored overnight (4°C). SFC represent the adjusted VZV ELISPOT response, i.e., the mean response to VZV antigen for replicate wells minus the mean response to MRC-5 control antigen for replicate wells.
产品优势：
1. 酵母重组表达，无细菌内毒素残留。【大部分商业化的Benonase都是大肠杆菌重组表达，由于自身菌株特性，不管纯化方法如何，或多或少都会受细菌内毒素影响。】
2. 无蛋白酶残留，不会对蛋白本身造成干扰，影响测试结果准确性。
3. 比活力高≥1.0×106 U/mg蛋白【活性单位定义：在37℃，pH8.0反应条件，2.625ml反应体系中，30min内使△A260吸收值变化1.0（相当于*消化37μg 鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）】
4. 提供两种纯度的产品：≥ 90%（SDS-PAGE），以及≥ 99%（SDS-PAGE），前者满足zui基本的科研应用，价格更经济实惠；后者满足生物制品要求。
5. 酶活性值：≥250 U/μL。对于小体积制备物，可用稀释缓冲液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl稀释到一定浓度，再加入体系中。稀释后溶液可4℃保存几天维持稳定。
6. 液体酶形式提供，使用更方便。直接加入裂解液共同使用即可。
产品订购： 更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询。
货号 | 产品名称 | 规格 | CAS NO. | 价格（元） | 货期 |
MP1509-25KU | Benzonase Nuclease 核酸酶 | 25KU | 9025-65-4 | 400 | 现货 |
MP1509-50KU | Benzonase Nuclease 核酸酶 | 50KU | 9025-65-4 | 720 | 现货 |
MP1509-100KU | Benzonase Nuclease 核酸酶 | 100KU | 9025-65-4 | 1380 | 现货 |
常见问题（FAQs）：
问1：在实验的哪一步加入Benzonase核酸酶？ 答1：根据具体应用有所变化，但是总的原则是，在发酵步骤之后和蛋白收集之前加入Benzonase。 | |||||||||||||||||||||||||||
问2：如何稀释 Benzonase核酸酶？ 答2：一般建议按照1:1000-1:20000来稀释，具体根据实际应用浓度、反应体系、反应温度、作用时间等参数来灵活变动。使用稀释缓冲液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl来稀释，4℃保存几天稳定。现配现用。或使用贮存缓冲液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl, 50%甘油来稀释到一个中间浓度，-20℃保存长期稳定。 | |||||||||||||||||||||||||||
问3：Benzonase核酸酶是否无蛋白酶活性？ 答3：本品未检测到蛋白酶活性，因此使用过程中不会被降解。但是样品自身含有的蛋白酶可能会对本品造成不可逆的降解。 | |||||||||||||||||||||||||||
问4：Benzonase核酸酶是否安全？ 答4：内部毒性测试数据，单次注射小鼠和大鼠：发现在很高浓度下都没有毒性效应。另，*浓度静脉注射小鼠未观察到致突变性。 | |||||||||||||||||||||||||||
问5：为什么Benzonase核酸酶不工作？什么会抑制其活性？ 答5：在宽广的作用条件下Benzonase都具有活性【见下表】，然而，1-2mM Mg2+对酶活性维持是十分必要的。Mn2+可替代Mg2+，但Benzonase只有在Mg2+存在下才能达到zuijia工作活性。当单价阳离子浓度＞300mM，磷酸盐浓度＞100mM，硫酸铵浓度＞100mM的情况下，酶活性被抑制约50%。另外，＞1mM EDTA也会抑制酶活性。
| |||||||||||||||||||||||||||
问6：发现Benzonase核酸酶活性丧失，为什么？ 答6：Benzonase通常很稳定，但是某些情况会发生活力损失。有几种可能原因：由于样品中变性剂比如蛋白酶的存在或不正确保存方法引起的不可逆酶活性丧失；由于螯合剂如EDTA存在引起可逆失活，因其去除维持酶活必须的Mg2+。 | |||||||||||||||||||||||||||
问7：一不小心将Benzonase核酸酶置于工作台上整周，是否能继续使用？ 答7：Benzonase稳定性测试显示其十分稳定。25°C（湿度60%）保存数周酶活性不受影响。 | |||||||||||||||||||||||||||
问8：如何抑制Benzonase核酸酶活性？ 答8：操作体系中添加剂/试剂都有可能影响Benzonase活性——比如，高盐（单价阳离子浓度＞300mM，磷酸盐浓度＞100mM，硫酸铵浓度＞100mM）。其他已知抑制剂如螯合剂EDTA，导致Mg2+损失（EDTA＞1mM即可抑制酶活性），这一抑制可通过添加MgCl2来解除。 | |||||||||||||||||||||||||||
问9：如何去除体系中的Benzonase核酸酶？ 答9：通过以下几种下游的操作方法来去去除，比如澄清用的深度过滤法；TFF (Tangential flow filtration)；色谱纯化（IEX, SEC, HIC）等。 | |||||||||||||||||||||||||||
问10：Benzonase核酸酶与蛋白酶抑制剂cocktail兼容吗？ 答10：兼容。但需注意很多商业化的蛋白酶cocktails含有EDTA。＞1mM EDTA会抑制酶活性。 | |||||||||||||||||||||||||||
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅能用作科研用途，不可他用。
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供产品。