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Cell apoptosis细胞凋亡；Mitochondrial membrane potential线粒体膜电位；MitoTracker；MitoSOX；JC-1；JC-10；Rhodamine 123；CAS：555-60-2；

基本介绍：

线粒体（Mitochondrial）是一种存在于大多数真核细胞中的由两层膜包被的细胞器，约占细胞体积10%。作为一种多形细胞器，其结构因细胞类型、细胞周期状态意思胞内代谢状态而不断变化。线粒体至关重要的功能是由氧化磷酸化（Oxphos）和脂质氧化介导的能量产生。线粒体内还参与其他几种代谢活动，包括尿素生成，血红素和非血红素铁和类固醇生物起源，以及胞内钙离子（Ca2+）稳态。线粒体还在凋亡中发挥重要作用。目前对线粒体参与生理功能的了解只有很少一部分，而对其作用机理和调控方式的了解就更少。

线粒体（Mitochondrial）的分布依据细胞能量水平而变化，是细胞类型、细胞周期状态和增殖情况的一种功能表现。比如，褐色脂肪组织细胞，肝细胞和某些肾上皮细胞富集存在于活跃线粒体中，而静息免疫系统祖细胞或前体细胞使用线粒体选择性探针染色率很低。阿尔茨海默病线粒体数目减少，且其蛋白和核酸易被包括一氧化氮在内的活性氧（ROS）所攻击造成损伤。

我司提供一系列线粒体选择性荧光探针和有机染料，能够用来监测细胞形态和细胞器功能。大多数线粒体选择性有机染料的摄取依赖于线粒体膜电位。因此这些染料能让研究者标记线粒体活动、定位、含量，以及观察一些能改变线粒体功能的某些药物的生理效应。

线粒体探针：

一、MitoTracker Probes（可固定的线粒体选择性探针）

1）传统线粒体探针的缺点：

传统线粒体探针如罗丹明123（Rhodamine 123）虽然可立即聚集在功能线粒体上，然而，一旦线粒体膜电位丧失，这些探针就能很容易清洗掉离开细胞。当碰到细胞需要进行醛类固定或细胞内含影响膜电位药物的实验中，这些探针则受到限制，不可使用。

2）MitoTracker线粒体探针的优点

Mitotracker正克服传统探针的缺点而被生产，其能够聚集在活线粒体上，并且细胞固定中也能良好维持。其中，Mitotracker orange，red，and deep red这三种探针经透化（permeabilization）后仍能良好维持。在接下来免疫细胞化学（ICC）、原位杂交（ISH）或电镜实验的处理步骤中样本仍保留线粒体的活细胞染色形态。另外，Mitotracker探针去除病原细胞线粒体染色可能遇到的一些问题，因为一旦线粒体染色后，细胞即可被固定然后进行结果分析。

3）MitoTracker线粒体探针产品

我们提供7种Mitotracker探针，它们在光谱特性、氧化态以及可否固定几个参数上有所差异，具体见下表。

【注1】：MitoTracker® Green FM（#M7514）在水溶液中无荧光；

【注2】：MitoTracker® Orange CM-H2TMRos（#M7511），MitoTracker® Red CM-H2XRos（#M7513）为还原态探针，无荧光。只有被氧化后才发荧光。

4）MitoTracker线粒体探针订购信息

以上所有产品均为Life（Invitrogen）原装，原始包装为20x50 µg（20支50µg单个包装构成）。我司对M7512，M7514，M22426进行拆开销售，特惠价为350元/支，单支50µg；对M7513，单支优惠价格为400元。现货销售，欢迎订购。

二、MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator（线粒体超氧化物探针）

1）背景介绍

线粒体超氧化物（Mitochondrial superoxide）是氧化磷酸化的副产物。一条紧密偶联的电子运传递链中约1-3%被消耗的线粒体氧不能*被还原，这些‘遗漏’的电子能与分子氧快速反应产生超氧阴离子，即线粒体中含量zui高的活性氧（ROS）分子。细胞过氧化物生成量的增加在心血管疾病中得到阐释，这些疾病包括高血压、动脉粥样硬化和糖尿病相关的血管损伤，以及神经退化疾病如帕金森疾病，阿尔茨海默病和肌wei缩性[脊髓]侧索硬化（ALS）。

2）产品描述

MitoSOX红色线粒体超氧化物荧光探针（MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator）是二氢乙啶（dihydroethidum，DHE）的一种阳离子衍生物，特别设计高度特异性检测活细胞线粒体超氧化物。

MitoSOX Red是一种特异性靶向活细胞线粒体的新型荧光探针，具细胞膜渗透性，且能快速和选择性结合线粒体。一旦进入线粒体，被超氧化物氧化，与核酸结合后产生很强的红色荧光。MitoSOX Red能够立即被超氧化物，并不是其他ROS-或RNS（活性氮）生成系统氧化。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）能够预防MitoSOX Red被氧化。

MitoSOX Red可用于在对活细胞线粒体释放的超氧化物的直接检测中区别纯化线粒体的人为误差。另外，MitoSOX Red是一种有价值的工具，用来筛选多种疾病中调节氧化应激的药物。

3）产品特点

• 容易为超氧化物而不是其他的ROS、RNS生成系统氧化

• 吸收波长⁄发射波长zui大值：~510⁄580 nm

• 用于活细胞成像

  快速选择性靶向线粒体

4）MitoSOX Red订购信息

以上所有产品均为Life（Invitrogen）原装，原始包装为10x50 µg（10支50µg单个包装构成）。我司对M36008进行拆开销售，特惠价为650元/支，单支50µg，现货销售，欢迎订购。

三、JC-1/JC-10线粒体膜电位检测探针（早期凋亡检测）

1）背景介绍

线粒体膜通透性的改变是细胞早期凋亡发生的重要特征之一。

凋亡早期，线粒体膜通透性增加，线粒体蛋白包括：细胞色素C、Smac/DIABLO、HtrA2/OMI、核酸内切酶G（EndoG）、凋亡诱导因子（AIF）等，从线粒体基质释放到细胞浆。细胞色素C的释放伴随着线粒体膜电位的丧失，呼吸链障碍，钙离子的释放。

线粒体膜电位的破坏是诱导细胞凋亡后zui早发生的胞内事件，目前常用一些亲脂性阳离子染料如JC-1，JC-10，罗丹明123（Rhodamine 123）等在线粒体膜电位变化中聚合形式的差异来区分正常细胞和凋亡细胞。基本原理是：正常细胞中阳离子染料在线粒体中积累并聚合，聚合物发出强烈的红色荧光；凋亡细胞中由于线粒体膜电位的丧失，染料不能在线粒体中积累并以单体形式存在于胞浆中，单体发出绿色荧光。

2）产品描述

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电△Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。

JC-10是JC-1的升级产品，优势在其比JC-1具更好的水溶性，特别适合替代需要更好染料浓度的实验。JC-10的检测原理同JC-1。

3）订购信息

4）相关产品（凋亡诱导剂）

线粒体凋亡研究中常需要阳性诱导剂建立阳性的凋亡模型，从而用于细胞凋亡机理或凋亡相关药物的筛选。

CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一种质子载体（H+ionophore），是一种强效的线粒体氧化磷酸化解偶联剂，促使线粒体内膜对H+产生通透性，导致线粒体内膜两侧的膜电位丧失，诱导凋亡发生。也可作用于叶绿体膜，抑制光合作用；CCCP还可抑制内质网-高尔基体（ER-Golgi）之间的蛋白转运，高亲和力结合细胞色素C氧化酶。

FCCP，即Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone，一种质子载体（H+ionophore），也是一种强效的线粒体氧化磷酸化解偶联剂，促使质膜和线粒体膜去极化。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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