微生物的生长,除了受本身的遗传特性决定外,还受到许多外界因素的影响,如营养物浓度、温度、水分、氧气、pH等。微生物的种类不同,培养的方式和条件也不尽相同,其贮存方法也是很有讲究的。
细菌和其它生物一样,大多数属异养菌,必须从周围环境中摄取营养,进行新陈代谢及生长繁殖等生命活动。人为的提供细菌生长繁殖所需的营养物质(适宜的培养基)和创造适合细菌生长繁殖的有利条件如温度、湿度、气体等,能使细菌在体外迅速生长繁殖。
正确配制培养基是微生物培养的基础步骤之一,实验室使用各种基础成分制备培养基时,应按照配方准确配制,并记录相关信息,如:培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积(分装体积)、无菌措施(包括实施的方式、温度及时间)、配置日期、人员等,以便溯源。
培养基灭菌常见的灭菌方法有:
1.化学物质灭菌:药物与微生物细胞中的成分反应,使蛋白质变性、酶失活;使用范围:器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌,不能用于培养基灭菌;常用的有酒精、来苏尔等。
2.辐射灭菌:原理是利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡;常用的有紫外线、X射线和γ射线,用于室内空气及器皿表面灭菌。
3.干热灭菌:原理是利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物;常用灼烧和电热箱加热,140-180℃ 1-2小时,适于对玻璃及金属用具及沙土管灭菌。
4.湿热灭菌:原理是直接用蒸汽灭菌,蒸汽在冷凝时能释放出大量潜热,蒸汽具有强大的穿透力,破坏菌体蛋白和核酸的化学键,使酶失活,微生物因代谢障碍而死亡,水煮常压灭菌:100℃,或饱和蒸汽灭菌:一般121℃,30分钟,适合培养基和发酵设备灭菌。
5.过滤除菌:除菌原理是利用微生物不能透过滤膜除菌,方法是使用0.01~0.45 μm孔径滤膜,用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。